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湖南韻邦IPTG提純工藝實現再突破


IPTG的純化發展背景:
異丙基-β-硫代半乳糖苷(簡稱IPTG, CAS No:367-93-1)是一種性能極為優越的誘導劑,由于其不易被細菌代謝,用于誘導蛋白表達具有良好的穩定性,在實驗室和工業生產中廣泛使用。由于其廣泛的需求,人們對其合成研究很多。
 
作為一種分子生物學試劑,IPTG的性能與其產品質量密切相關。一些不必要雜質的存在會嚴重影響其誘導能力,又由于IPTG合成過程中容易產生諸如異丙基-α-硫代半乳糖苷等異構體雜質,且這些雜質與IPTG結構和物理化學性質相似,難以通過常規的分離方法將其除去,導致通過這些方法合成的或市面上在售的IPTG其誘導表達能力被削弱。因此,急需一種方便的IPTG純化方法,提高通過目前方法合成的或市面上可購買的IPTG的純度與誘導能力。
 
為解決上述技術問題,湖南韻邦發明提供了一種IPTG的純化方法,以達到可以方便快速地分離純化IPTG,提高IPTG的純度與誘導能力的目的。
 
為達到上述目的,湖南韻邦改良提純的技術方案如下:
先將IPTG和互不相溶的兩種溶劑在加熱或常溫條件下制成雙相均沒有不溶性固體的溶液,再將該雙相體系降溫,析出IPTG晶體。所述互不相溶的兩種溶劑中一種為水,另一種為與水不溶的有機溶劑。
上述方案中,將IPTG、水以及有機溶劑一起加熱制備雙相均沒有不溶性固體的溶液,或者將IPTG和水先加熱一段時間再加入有機溶劑,或者將IPTG和有機溶劑先加熱一段時間再加入水。
 
上述方案中,所述有機溶劑包括乙醚、叔丁基甲基醚、二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、正丁醇、異丁醇、仲丁醇、叔丁醇、含4-10個碳原子的烷烴、石油醚、苯、含取代基的苯以及丁酮中的一種或幾種。
進一步的方案中,所述含4-10個碳原子的烷烴具有以下結構特征:CxHy,其中,x= 4~10,y=8~22。
進一步的方案中,所述含取代基的苯具有以下結構特征:其中R為F、Cl、Br、I、NO2、OR1、NR2R3、R4中的一種;R1為氫原子,或為含1~10個碳原子的烷基;R2和R3為氫原子,或為含1~10個碳原子的烷基;R4為含1~10個碳原子的烷基。
更優選的,所述加熱的溫度為40~110℃。
優選的,互不相溶的兩種溶劑的總質量與IPTG的質量比為0 .5~50:1。
 
湖南韻邦IPTG提純工藝對行業產生的重大影響:
通過上述技術方案,湖南韻邦提供的IPTG的純化方法采用重結晶的方法進行純化,通過控制結晶參數,可以得到不同晶型、不同純度的晶體。初始形成的晶核對所得晶體的晶型和純度有重要影響。
 
根據本發明提供的方法對IPTG進行重結晶,由于結晶體系中存在油水界面,和一般結晶條件下晶核形成機制不同,所形成的晶體的晶型和純度也不同。這是本發明提供的方法能提供優良IPTG產品的理論基礎。
 
湖南韻邦發明提供通過重結晶提高IPTG質量的方法,操作簡便,易于工業化。且采用本發明提供的方法對IPTG進行重結晶,所獲得的IPTG產品比采用單相溶劑體系對IPTG進行重結晶獲得IPTG產品具有更好的外觀和純度。所得晶體可用于細菌內蛋白表達的誘導,且具有更強的誘導能力,因此具有更高的附加價值。
已經到最底了
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